生物荧光分析滤光片

2024-08-15 派大星

生物荧光分析滤光片


在荧光光谱中,来自宽带光源或激光的光入射到样品上,然后样品可能会发出微弱的荧光信号。荧光滤光片组通常由激发滤光片、二向色镜(二向分光镜)和发射滤光片组成,它们组合在一个滤光片立方体中。激发滤光片用于确保只有所需波长入射到样品上,而发射滤光片用于传递荧光信号并拒绝激发光和任何不需要的光。二向色镜通常以 45° 的入射角使用,以将激发光反射到样品并将发射信号传输到检测器。激发、发射和二向色滤光片通常成组使用,以最大化所需信号并最小化任何不需要的信号。

 荧光显微镜原理

(荧光显微镜原理)

生物荧光分析常用的就是荧光光谱法分析,常用于共聚焦光路和流式细胞术中。

共聚光路原理图

(共聚光路)

流式细胞分析的光学系统

光学系统由激光器和若干组透镜、滤光片及小孔组成,它们分别将不同波长的荧光信号送入到不同的电子探测器。其主要光学元件是分色反射镜(DL)和滤光片(filter)。分色反射镜(488DL、550DL、600DL、640DL)用于选择被测荧光波长,只允许大于特定波长的光通过,而将小于特定波长的光反射到光电检测器(长波通特性)。滤光片一般分为三类:长通滤片(long pass filter,LP)、短通滤片(short pass filter,SP)和带通滤片(band pass filter,BP)。

例如,FITC染料发射出525 nm的绿色荧光,PE染料发射出575 nm的橙色荧光,分别选择550DL和525BP组成的滤片组和600DL和575BP滤片组,即可达到特异地接收FITC和PE荧光信号的目的。光电倍增管和硅光电二极管,可分别将侧向散射光和前向散射光以及525~675等不同的荧光信号收集检测。

 流式细胞仪原理图

(流式细胞仪原理图)


原理描述:单细胞液流经过细胞室,激光照射细胞(或微粒),细胞或微粒上承载的荧光抗体被激发后发出特定波长的荧光,并分别通过不同滤光片,检测器收集不同波长的荧光信号,经计算机分析处理,将各通道的数字转换为图形显示出来。

滤光片

 

荧光滤光片参考

荧光滤光片(单波段带通)
通带(nm)工作波段(nm)
BP377带通滤光片352 - 402200 — 700
BP475457.5-492.5200—1000
BP559542 - 576200—1000
BP434425.5-442.5200—1000
BP469
451.5-486.5200—1000
BP497489 - 505200—1000
BP531511 - 551200—1000
BP628
608 - 648200—1000
BP655635 - 675200—1000


发射荧光片(单波段带通)通带(nm)工作波段(nm)
BP532505.5 - 544.5200 - 740
BP479459 - 499200 - 770
BP530
508.5 - 551.5200 - 800
BP535524 - 546200 - 800
BP447417 - 477200 - 1000
BP593
573 - 613400 - 925
BP692672 - 712400 - 925
BP716696 - 736400 - 925
BP630595 - 664515 - 800

 

二向色镜(长波荧光)通带范围(nm)反射范围(nm)
DMLP409415 - 570327 - 404
DMLP452
460 - 610423 - 445
DMLP497505 - 800452 - 490
DMLP499508 - 675470 - 490
DMLP516520 - 700490 - 510
DMLP562569 - 730490 - 555
DMLP582595 - 800533 - 580
DMLP660669 - 726594 - 651
DMLP685695 - 810600 - 676


电话咨询
邮件咨询
在线地图
QQ客服
Baidu
map